技术服务
SERVICE

噬菌体展示纳米抗体发现平台

服务简介

成都阿帕克建立了标准的羊驼养殖基地,保证了免疫过程的可控。我们采用先进的NGS测序与噬菌体展示技术相结合的方法,获得大量候选克隆,剔除CDR1/FR2与CDR3之间有二硫键的克隆,结合我们的在抗体研发方面的经验,可以为客户提供高亲和力和高特异性的纳米抗体。我们拥有一流的建库方法,采用同源重组的方法,避开了传统方法使用T4连接酶导致的连接效率低,同时采用“零背景”载体,正确插入率保证99.99%,一次电转化轻松制备109库容量的抗体库。

纳米抗体制制备与筛选流程

1.客户提供免疫抗原;

2。免疫鲨鱼,羊驼或者骆驼。

3。收集外周血B淋巴细胞,提取mRNA,逆转录制备cDNA。
4.采用同源重组的连接方法,将抗体基因连入噬菌粒载体,转化E coli,构建抗体库。
5.采用固相筛选,液相等多种方式,进行亲和筛选,筛选高亲和力纳米抗体。
6.采用高效原核或者真核表达系统,表达纳米抗体。
7.鉴定纳米抗体对抗原的结合活性。
8.提交报告。

阿帕克的优势

根据多年的纳米抗体研发经验,我们建立了:

1)新的连接方法,大大提高了连接效率,整个连接过程不需要T4 连接酶;

2)自主开发了噬菌体展示系统,采用"零背景载体”能够方便快捷的完成高质量的纳米抗体文库,保证插入率达到99。99%;

3)我们具有制备超高效率的电转感受态方法,使大肠杆菌的感受态效率轻松达到1010 ~1012,远超国内外产品;

4) 超高的连接方法与超级感受态联合使用,让电转效率大大提高,一次电转化就可达到109 ;

5)采用NGS测序与噬菌体展示技术相结合,可获得大量候选克隆,剔除CDR1/FR2与CDR3之间有二硫键的克隆

6)公司开发了具有自主知识产权的大肠杆菌纳米抗体分泌表达系统,配合自诱导方式,能够让几乎所有的纳米抗体得到可溶表达,同时让带有两对二硫键的纳米抗体在分泌的过程中形成二硫键,保持抗体活性,该系统摇瓶条件下,表达量高达100 mg~300 mg/L。



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